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人白細胞介素-2ELISA 檢測試劑盒
用 途:
人IL-2 ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、緩沖液中細胞上清液及各種體液中的IL-2 。本試劑盒可以檢測天然和重組的IL-2 。本試劑盒于科研、而非用于臨床診斷。
試驗原理:
人IL-2 試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知IL-2 濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將IL-2 和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-2 的濃度呈比例關系。
自備材料
蒸餾水。
加樣器:5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
此試劑盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV為陰性,但沒有實驗室可*保證此血制品不會傳染肝炎、AIDS或其它傳染病,依據(jù)當?shù)氐陌踩珬l例處理本試劑盒里的成份及血清和血漿等樣品。
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
人白細胞介素-2ELISA 檢測試劑盒
操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
洗滌緩沖液(20×)的稀釋:蒸餾水20倍稀釋。
人白細胞介素-2ELISA 檢測試劑盒
操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育15分鐘。避免光照。
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果分析
以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的IL-2 標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的IL-2 含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
局限
6號標準品以上的結果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。
人白細胞介素-2ELISA 檢測試劑盒
試劑盒性能
靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
特異性:不與人其它細胞因子反應。
重復性:板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
Catalase, suspension 過氧化氫酶 [9001-05-2] 2g
Catechol 鄰苯二酚 [120-80-9] 100g
Chitin 幾丁質 [1398-61-4] 500g
Chlorazol black E 卡拉唑黑E [1937-37-7] 25g
Chloroform:isoamyl alcohol (24:1) / 100ml
Catechol violet 鄰苯二酚紫 [115-41-3] 25g
Cedar wood oil 香柏油 [8000-27-9] 25ml
Cefotaxime, sodium salt 頭孢噻肟鈉 [64485-93-4] 100g
Celestine blue B 天青石藍 [1562-90-9] 25g
Cell Isolation Optimizing System 細胞分離試劑盒 / 1kit
D-(+) Cellobiose D-纖維二糖 [528-50-7] 25g
Cellulase 纖維素酶 [9012-54-8] 1g
Cellulose, Microcrystalline 微晶纖維素 [9004-34-6] 100g
Cellulose acetate 乙酸纖維素 [9004-35-7] 100g
Cephalosporin C, sodium salt [51762-04-0] 25g
Cephalosporin C, sodium salt [51762-04-0] 100g
Chicago sky blue 6B 滂胺天藍 [2610-05-1] 25g
Cephalexin monohydrate 頭孢氨芐 [15686-71-2] 250mg
Cephalexin monohydrate 頭孢氨芐 [15686-71-2] 5g
Cephalexin monohydrate 頭孢氨芐 [15686-71-2] 25g
Cerium(III) acetate hydrate 乙酸鈰 [206996-60-3] 50g
Cerium(III) carbonate, hydrate 碳酸鈰 [54451-25-1] 50g
Cerium (III) chloride, heptahydrate 化鈰七水 [18618-55-8] 50g