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    我司分享:關(guān)于細(xì)胞傳代的操作

    發(fā)布時(shí)間: 2020-04-08  點(diǎn)擊次數(shù): 1461次

    1.細(xì)胞吸除培育瓶?jī)?nèi)舊培育液。

     

    2.參加無菌pbs洗液(5-8mL)悄悄潤(rùn)濕細(xì)胞,稀釋多余的培育基,之后吸走洗液,動(dòng)作要輕,不可吹打到細(xì)胞。

     

    3.向瓶?jī)?nèi)參加含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少許,以能覆滿瓶底為限。 

     

    4.置溫箱中2~5分鐘,一旦鏡檢發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮,細(xì)胞間隙增大后,細(xì)胞變圓,比較松動(dòng)后,當(dāng)即終止消化。
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    5.參加該細(xì)胞對(duì)應(yīng)的培育基6mL(T25培育瓶)或12mL(T75培育瓶)終止消化。

     

    6.用吸管通過吸取的培育基悄悄反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞,使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)應(yīng)盡量以少的次數(shù)將細(xì)胞從壁上吹下,不只要操控吹打的力度、次數(shù),還要留意要將細(xì)胞盡可能吹成單個(gè)。這樣既能削減死細(xì)胞,又能便于細(xì)胞再次均勻貼壁成長(zhǎng)。

     

    7.依據(jù)傳代份額,將細(xì)胞懸液分瓶,再補(bǔ)充培育基后,靜置于溫箱培育,直止貼壁。

     

    貼壁細(xì)胞在培育瓶長(zhǎng)成致密單層后,持續(xù)成長(zhǎng)的空間缺乏,培育基中的養(yǎng)分成份也耗費(fèi)較多,同時(shí)代謝廢物也有較多堆積,需要分瓶培育,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代擴(kuò)增。關(guān)于貼壁不太緊的細(xì)胞如293,能夠直接吹散后分瓶。而關(guān)于貼壁較緊的細(xì)胞如CHO,則需要以胰酶消化后再吹散分瓶。

     

    關(guān)于懸浮細(xì)胞換液時(shí)只需要補(bǔ)液就行。

     

    懸浮細(xì)胞的傳代則不需要用胰酶消化,直接通過計(jì)數(shù)算好傳代的份額,直接分瓶,補(bǔ)液。有些懸浮細(xì)胞趨于成團(tuán)成長(zhǎng),此刻細(xì)胞成長(zhǎng)狀態(tài)杰出,當(dāng)補(bǔ)液時(shí),防止吹打。典型實(shí)例:jurkat便是成團(tuán)成長(zhǎng)。當(dāng)jurkat細(xì)胞密度比較大時(shí),可將培育瓶豎直放置2分鐘左右,待大部分細(xì)胞沉下,吸走上層清液,補(bǔ)充等量的新鮮培育基。

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